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 分類: 群體遺傳

昨天很重要,它構(gòu)建了我們的記憶。

原文:

Jan Bettgenhaeuser, Simon G. Krattinger. Rapid gene cloning in cereals, Theoretical and Applied Genetics, 2018.

過去二十年,基因組學(xué)革命導(dǎo)致作物研究、植物育種、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域發(fā)生了翻天覆地的變化,今天,主要的作物品種都有了自己高質(zhì)量的參考基因組,大量的重測序和泛基因組研究正向我們揭示著新的種間與種內(nèi)的多樣性,基因型與表型的關(guān)系。當(dāng)克隆基因越來越容易,大而復(fù)雜的基因組不再是定位基因中難以攻克的壁壘,百邁客特別推出了<<快速克隆基因,您準備好了嗎?>>系列1,2,3,與您詳細解讀這篇文章。

ATCG不規(guī)則的排列組合組成了地球上近870萬個物種形形色色的遺傳物質(zhì),而解密其內(nèi)在調(diào)控機制是生物工作者心心念念奮斗的目標。1977年,噬菌體ΦX174長達5375-bp基因組被測序完成,基因組測序事業(yè)開始蓬勃發(fā)展,時至今日,NCBI收錄了超過6000個真核生物和150,000個原核生物的測序數(shù)據(jù),其中包括禾本科。而基因組研究目的也從單純的科學(xué)研究向?qū)嵺`應(yīng)用發(fā)生著轉(zhuǎn)換?;蚪M學(xué)和生物技術(shù)相結(jié)合,包括標記輔助選擇,基因組選擇和基因編輯,已成為育種中不可缺少的工具,功能基因的定位和克隆將會把這種技術(shù)的結(jié)合作用發(fā)揮更大。

禾本科這個神奇的科屬,是全球大部分食品飼料來源,為我們提供了超過50%的卡路里,它包括小麥,大米,玉米,大麥,高粱和小米等。大約在4500萬至6000萬年前,現(xiàn)代谷物共享了一個共同的祖先,雖然禾本科植物親緣關(guān)系較近,但它們的基因組差異比較大,例如,水稻的基因組大小為380M,相當(dāng)于小麥基因組的2.4%。今天,較多的作物基因組被測序,自2005年水稻基因組測序完成以來,高粱、玉米、大麥、珍珠粟、小麥基因組相繼測序完成,這些高質(zhì)量的參考基因組是谷物遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究中的里程碑。

那在基因定位中,參考基因組發(fā)揮著什么樣的作用?如下圖所示,自有參考基因組后,一個簡單的文獻檢索顯示有關(guān)水稻、擬南芥“基因克隆”的文章數(shù)量已經(jīng)飆升,而2009年完成的2.3-Gb玉米基因組對克隆基因的數(shù)量影響貌似不是不大,這可能因為盡管有高質(zhì)量的可用性參考序列,大基因組仍然是基因克隆的主要障礙。參考序列只是基因組功能的一個墊腳石,在擁有大而復(fù)雜的基因組的物種中仍然需要創(chuàng)新的定位方法。

將植物的表型變異與基因組差異聯(lián)系起來,一直是植物研究和育種中的永恒命題,隨著分子標記技術(shù)的出現(xiàn)和復(fù)雜的統(tǒng)計工具的使用,解剖復(fù)雜性狀的遺傳變異成為可能。目前使用最多的兩種方法為QTL定位和GWAS分析,隨著DNA測序的發(fā)展,早在20世紀90年代和21世紀初,涌現(xiàn)出RFLP,SSR,SNP等多種不同的分子標記。QTL分析和GWAS均是尋找與性狀連鎖的分子標記,盡管這兩種方法較難直接定位到基因,但對鑒定主要的QTL還是很準確的。圖位克隆也是定位基因的有效方法,利用染色體步移的方法縮小候選基因區(qū)段。例如水稻中抗病基因Xa21的克隆。Xa21來源于非洲野生稻,1992年,應(yīng)用RFLP和RAPD標記將Xa21定位到11號染色體1.2-cM處。1995年利用連鎖標記篩選BAC文庫,將Xa21定位至9.6kb區(qū)段內(nèi)找到了功能基因。Xa21發(fā)現(xiàn)于1985年,而它的定位克隆完成發(fā)生在10年后,由此來看,圖位克隆是定位基因的有效方法,但在沒有參考基因的情況下,還是很費時費力費成本的。
而現(xiàn)在的我們,應(yīng)用了什么樣的方法,去提高這種效率呢?請持續(xù)關(guān)注后面的分享。

參考文獻:

  • Ni J,Pujar A,et al. Gramene QTL database:development, content and applications. Database 2009
  • Wang GL, Holsten TE,et al .Construction of a rice bacterial artifcial chromosome library and identifcation of clones linked to the Xa-21 disease resistance locus.Plant J,1995
  • Jan B, Simon G,Rapid gene cloning in cereals,Theoretical and Applied Genetics ,2018
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